一岁一团圆，细胞抱团是惊喜还是惊吓

经常会听到小伙伴们问：

细胞传代时候会大量抱团，不是单个细胞，是什么原因?是消化过度了还是消化不完全?

细胞消化不成单个细胞，出现抱团现象，怎么处理？

细胞抱团生长，这种状态正常吗？

细胞成团生长且生长缓慢？该怎么办？

我们做细胞实验的时候经常会碰到细胞抱团的现象，有些时候细胞抱团对我们下一步实验没什么影响，但是当影响实验的时候就简直抓狂。当检测细胞克隆形成率、铺单克隆以及电转等，这时候细胞要是抱团了，得到的结果基本上都是不可靠的，那么细胞为什么会抱团呢？又该如何避免？接下来就一次性给小伙伴们讲清楚吧！

细胞抱团的原因可能有：

1、消化时间控制不当

• 有些小伙伴们不管什么细胞都消化3分钟左右，然后用手拍打培养瓶使细胞成片脱落，但有些细胞消化不完全，细胞和细胞之间的连接没有分开，这个时候就拍打下来很容易造成细胞聚团；
• 也不可消化过度，圆形的细胞容易聚堆，想要通过后面的步骤吹打分开是很难的！

正确做法：培养前充分了解细胞的特性，可向购买细胞的厂家咨询，也可在网上查询确定细胞的最佳消化时间。

2、传代时操作不当

• 传代时细胞吹打不均匀，没有将细胞团吹散；
• 吹打太用力造成细胞死亡，细胞死亡释放的DNA与其他细胞形成黏性的细胞团；
• 细胞离心速度多大或者离心时间过长；
• 细胞长的太满才进行传代操作。

正确做法：

• 消化前加入适量缓冲液对细胞进行清洗，清除死亡的细胞团和部分堆叠杂质；
• 消化后吹打时上下左右吹打约10次左右，注意控制力度；
• 确定细胞正确的离心条件，严格按条件执行；
• 细胞汇合度在80%~90%即可传代。

3、细胞状态不好

细胞状态不好以及发生老化也可能造成细胞抱团。

正确做法：及时换液或者传代，检查培养体系是否适合细胞。

4、细胞接种不当

细胞转移至培养瓶/皿时细胞分布不均匀，或者细胞接种密度过高。

正确做法：

• 细胞转移至培养瓶后可按倒8字形状摇匀（即∞）；
• 但对于像96孔板这种小型培养皿，需要在接种前把细胞混匀，接种后不可再摇，否则很容易全部聚集在孔板的中间。若已经接种了发现不均匀，可用枪头轻轻吹打混匀；
• 接种前进行细胞计数，按照正确的接种密度接种。

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