原代细胞（Primary cells）是指来源活体组织，经特定分离方法制备而成的初始细胞。原代细胞离体时间短且不经过永生化过程，其生物学特性未发生很大变化，仍保持原有的遗传特征，可更好地反映细胞在体内的生长状态，从而获得与体内生理功能更接近的数据。

 

1. 基因敲除小鼠原代细胞提取的应用

从某个特定基因敲除（Knock out，KO）小鼠的特定组织中提取原代细胞，则可直接得到目的基因不表达的原代细胞模型，且与我们在KO小鼠上的研究具有更好的承接性，从而让我们想要证实的实验目的更具有说服性。

 

近年来，多个发表在高分期刊如Scientific Reports的文章均有采用KO小鼠的原代细胞进行实验验证的案例。另外，KO小鼠的原代细胞还可用于细胞水平的药物筛选、药物评价等方面。

 

2. 基因敲除小鼠原代细胞提取服务平台

赛业生物完全性基因敲除小鼠是通过CRISPR/Cas9技术，针对靶基因设计和构建gRNA与Cas9表达质粒，造成目的基因的功能区域被敲除，获得全身所有的组织和细胞中都不表达该基因的小鼠模型。我们目前已经建立了上万种的KO小鼠模型库，可为客户提供多种KO小鼠原代细胞的需求。

 

（1） 现有海量的基因敲除小鼠资源库

超16000品系CRISPR-AI敲除小鼠资源库提供丰富的基因敲除小鼠品系，可大幅度缩短从基因敲除模型构建到原代细胞提取的周期。

赛业生物敲除小鼠资源库包括心脑血管疾病、神经系统疾病、肿瘤、免疫、代谢等多种疾病相关基因的KO小鼠模型。根据研究目的基因不同，我们可提取的原代细胞类型包括：上皮细胞、内皮细胞、成纤维细胞、肌细胞，其中每种细胞包含20~30种不同的组织来源，可最大限度满足不同客户的需求。

 

（2）一站式细胞提取、传代培养及检测平台

赛业生物在细胞生物学领域深耕15年，具备丰富的细胞原代提取、培养及检测经验。原代细胞均取自新鲜组织，每批细胞都经过免疫荧光/流式细胞方法检测细胞的复苏活性和增殖能力等，此外，赛业生物还可提供肿瘤细胞、体细胞常规检测、免疫学检测、组织学检测、干细胞干性分析和血管形成等常规细胞生物学技术服务。

 

（3）平台成熟稳定

赛业生物作为一家综合解决方案提供商，依托超16000品系的KO小鼠资源库、高效且智能化的模式动物定制平台、药物筛选评价小鼠模型平台、成熟的细胞技术服务平台等，建立了多位一体的创新性CRO平台服务网络，以服务于各种领域的科学研究及药物研发筛选，并与全球100多个国家和地区的数万名科学家及企事业单位建立了广泛的合作，产品和技术已直接应用于包括CNS（Cell，Nature, Science）三大期刊在内的4800余篇学术论文。赛业生物已获得ISO9001:2015和AAALAC双认证，确保所有产品和技术服务符合国际标准。

 

原代细胞提取成功率对个人操作技术和实验室环境的要求很高，而且还需要对细胞进行鉴定，这也是一项技术上的考验。

在细胞生物学领域有实力的，缺少赛业在模式动物领域的积累。

在模式动物领域实力的，缺少赛业细胞生物学平台的沉淀。

从体外细胞实验到体内动物实验，找赛业，就对了!

 

3. 服务流程

☑ 提供细胞信息

☑ 确定服务方案

☑ 协议签订

☑ 实验进行

☑ 细胞鉴定及检测

☑ 项目交付

 

4. 成功案例

图1. 卵巢上皮细胞，20X

 

图2. 动脉内皮细胞，5X

 

图3. 心房肌细胞，5X

 

图4. 动脉平滑肌细胞，5x

 

参考文献：

1. Selective deletion of endothelial cell calpain in mice reduces diabetic cardiomyopathy by improving angiogenesis.

Diabetologia. 62(5):860-872. doi: 10.1007/s00125-019-4828-y.

2. TREM2 promotes Aβ phagocytosis by upregulating C/EBPα-dependent CD36 expression in microglia.

Scientific Reports.7:11118 doi: 10.1038/s41598-017-11634-x.